为什么大肠杆菌复苏时间过长

① 细菌（大肠杆菌）作镜检用，在固体培养基上培养的时间易为多久

24 小时，或稍早，时间过久影响会比较大。 我指的影响是革兰氏染色。
时间延长菌体本身基本无变化，就是会有衰老死亡的菌体，镜检呈破裂状，就是融化的感觉。

有问题再问我喔

② 史上最离奇的OD回长事件

下面是一个论坛中的帖子与回复，希望能够对你有所帮助：|
我取的-20度甘油保存的菌，过夜复苏，然后按1：100扩大摇一段时间之后加IPTG诱导，摇了3小时之后培养物居然变清亮了！我白思不得其解
望高手指点一下！
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你说的培养物变清凉是相对于1%接种后而言的吗?1：100扩大培养后，细菌变得有多浑浊(测定OD600，一般达到0.5-1.0)?如果加入IPTG后细菌生长得很慢属于正常现象，因为IPTG对细胞有毒性，加之有抗性压力，不携带质粒的细胞是不生长的.关于你遇到的情况，我想可能是:
1.工程菌的问题，可能携带的质粒已经丢失，工程菌不具有抗性，建议在诱导前先检测一下质粒稳定性.
2.活化诱导时加入的抗生素过低未加或失效，扩大培养时加入抗生素又过量，建议重新配制抗生素.
3.加入的IPTG浓度过高.
4.培养基的问题，营养不足.
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1.工程菌的问题，可能携带的质粒已经丢失，工程菌不具有抗性，建议在诱导前先检测一下质粒稳定性.
2.活化诱导时加入的抗生素过低未加或失效，扩大培养时加入抗生素又过量，建议重新配制抗生素，这条也比较勉强。
3.加入的IPTG浓度过高.
4.培养基的问题，营养不足. ，这条不会！
5.噬菌体污染，导致菌体降解。可以重新转化新的感受态细胞。
6。对部分重组菌来说，过低的诱导前菌量常导致有毒性的IPTG诱导后菌体崩解。
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1:不加IPTG时怎么样。
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不加IPTG 时很正常。后来我换IPTG重复做了一次，菌摇浑了，但菌量不大。同时我在平皿划线挑单菌落培养，提质粒检测发现有的已经丢失了，有的仍完好。为保险，我重新转化了质粒。现在情况比较正常。
多谢各位战友的指教！！！
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会不会是噬菌体污染呢？
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我也怀疑过，因为实验室有人在做噬菌体，但是在一个单独的屋子做。而且整个实验室就我一个人遇到这种情况，我想这种可能性比较小。
幸运地是，现在一切良好，进展还算顺利。
谢谢大家
愿人人事事进展顺利！！！
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我也学到了一点，谢谢
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To:wangjun2002274 我的意见与您相左：
我也遇到过以上的情况，抗生素我是以50ug/ml加kan的。培养基是LB这不会有什么问题。IPTG诱导之前菌体很浑OD达到0.8左右，加IPTG以后3小时就变清！这个菌种是我4天前复苏的，之后放4度冰箱。但是我后来把菌种重新复苏效果挺好的！包涵体的量也挺好！我的看法是，复苏菌时间不能太长（以6-7小时为宜），即OD值不能太高。尤其是Bl21菌，因为它繁殖速度是DH5a无法比拟的！菌体太老再加上IPTG的毒性是变清的主要原因。我认为。
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我觉得可能是遭不明微生物污染了，尤其是很快即变清亮的话十有***都是遭噬菌体了。OD值高低应不是问题，我在发酵罐中OD600达10左右才开始诱导都没问题。
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不晓得楼主出现问题的原因是否与此一样：
早上我扩大培养摇了两瓶菌，2个小时浑的很好。加IPTG（不同来源的即我上次出问题的和我借别人的）后，有一瓶（我上次出问题的IPTG）清亮了。我认为是IPTG的原因。为了更确认我用同样的培养基和IPTG又要了两瓶，结果出我意料两瓶都浑得很好。所以我得出以下结论：摇菌的容器有问题！！！因为最近我们实验室换了一种洗洁净，清洗时未洗净！我们实验室也有人出现类似情况（最近）。我认为残留与IPTG可能形成对细菌有毒的物质，致使菌体死亡，菌液变清！

③ 做微生物实验，测抑菌圈大小，细菌培养超过24小时要不要紧啊

作为生物实验测抑菌圈大小细菌培养超过24小时要不要紧呢？这样根据他们所培养的时间，有可能他们是需要三天，72个小时，只要他们时间得体的话，他们才能出现这种情况

④ 发酵大肠杆菌时，摇瓶接种至种子罐或发酵罐后不生长，或是长了一段时间又死了，请列举说明可能的原因

可能存在两个问题，
1，没有染菌，但出现发酵过程中质粒丢失。不知道你在上罐的时候是否加压？可以试一下。
2，存在染菌，上罐就出现这种情况，可能是培养基没有灭彻底，或者是发酵罐中存在灭菌死角，还有就是空气过滤系统。这个就需要一一进行检测了。

⑤ 大肠杆菌存活问题

盐浓度12%的豆瓣酱，40℃，大肠杆菌不会增殖，但是会永远存活。一旦盐浓度和温度变得适宜，将很快复苏增殖。

⑥ 目前已有-195℃的生物低温保藏技术，请问到低温多少度细菌病毒等就不能再度复苏

低温杀不死细菌和病毒的，一般生物学都是用超低温保存这些东西的。。。
要杀死细菌和病毒需要高温，一般高压灭菌121℃ 20分钟就可以杀死这些东西了
-196℃已经是地球上最低的温度了
理论上低温是杀不死微生物的。。。。。。。。。。
只能高温杀死

⑦ 高中生物 赫尔希和蔡斯的T2噬菌体侵染大肠杆菌的实验，

不要听楼上乱讲，上清液是没有进入细菌内的噬菌体的蛋白质外壳，而沉淀物是细菌内的新生成的子代噬菌体。
首先你要了解噬菌体的生活过程，它是先与细菌接触，将自身的遗传物质核酸（此处为DNA）注入到细菌体内，在细菌体内以注入的DNA为模板，利用细菌内游离的物质作为原料，合成DNA和蛋白质，形成子代的噬菌体，最终使细菌裂解，释放出其中的子代噬菌体，完成繁殖后代的过程。
所以，书上实验中，当我标记蛋白质时，由于蛋白质外壳没有进去，所以放射性位于上清液；当我标记DNA时，DNA进去了，所以反射性位于沉淀物中。
当然赫尔希和蔡斯的实验是与我们的理解反过来，他们正是通过这个实验知道了噬菌体的DNA进入了细菌而蛋白质外壳没有进入，从而证明了噬菌体的遗传物质是DNA。

⑧ 大肠杆菌的侵染实验～搅拌充分与不充分～保温时间过长过短分别影响s或p的哪一与组造成什么结果

搅拌不充分: 用35S标记实验时,沉淀物出现少量放射性,是少量噬菌体的蛋白质外壳吸附在大肠杆菌表面,随大肠杆菌离心到沉淀物中,使沉淀物中也会出现少量的放射性.
保温时间过短:用32P标记实验时,一部分噬菌体没有侵染到大肠杆菌细胞内,经离心后分布在上清液中,使得上清液出现放射性。
保温时间过长:用32P标记实验时,噬菌体在大肠杆菌体内增殖后释放子代,经离心后也会分布在上清液中,也会使上清液放射性含量升高。

⑨ 为什么重组大肠杆菌发酵10几小时后补料加快pH还是上升（补料主要由甘油组成，另外还有蛋白胨，酵母膏）

诱导以后PH应该上升的，你发酵过程中pH是怎么调的，补碱吗？可能在延长一段时间pH与溶氧有可能会回升