凝血样本为什么不能放置太长时间

Ⅰ 如何应对临床血样的溶血问题

[返回]前言近十年随着实验室诊断技术和方法的发展，目前的临床实验室检测不仅包括病理学诊断，还包括对疾病风险（预防）和治疗过程（治疗）的监测。基因组学、药物基因组学、蛋白组学和治疗诊断学使得实验室检测成为复杂的综合过程。但是，以上这些进步还不能避免实验室检测中一直存在的问题，即产生检测错误以致诊断推理过程受到影响或者出现错误，进一步增加诊治费用和危害患者健康。通常的医疗事故由不恰当的或者延迟的临床干预引起，导致事故的医疗环节主要是诊断的错误或者延迟，占医疗事故的26%至78%。根据Lundberg大脑-大脑回路理论，所有的检测过程开始于医生的大脑中临床假设的模式，继而是最恰当的检测方法的选择，然后是患者的准备、生物学样本的采集、处理（样本分析前过程）、样本分析（分析过程），最后将结果报告给医生（分析后过程）。在这一复杂的检测过程中，患者检测结果的正确性依赖于样本分析前过程中各个步骤和分析过程的有效性。样本分析前过程中患者个体原因或者整个程序设计的缺陷（毕竟这是一个劳动密集型程序）可以导致错误的发生。样本分析前问题约占医疗错误的70%，最常见的分析前问题归纳为：样本采集失效，包括样本质量问题（溶血、凝血、污染），样本容量不足，采集容器错误和样本识别错误，其中溶血样本是所有问题中最为常见的，约占40%-70%之多。由于溶血导致临床实验室大量检测结果无效，因此欧洲样本分析前科学委员会意识到应该对其给予足够的重视。样本溶血的原因和本质临床溶血的定义为游离血红蛋白的浓度高于0.3g/L（18.8μmol/L），使血浆或者血清样本出现肉眼可见的粉色至红色外观，即溶血红细胞至少为0.5%。发生溶血的原因多与样本采集或者处理有关（图1）。如血液抽取过程中沾染皮肤上过多的酒精，通过刻度很小的针头，静脉不易取血或者不易找到，静脉过脆或者过细，取血管路局部阻塞或者注射器负压过高，取血管预充EDTA，过度摇晃或者搅拌样本，样本置于高温或者低温环境，高速长时间离心或者样本分离前放置时间过久，样本分离容器不完整或者凝胶分离试管重复离心。此外，多种原因也可发生体内溶血，如自身免疫性贫血和其他原因的血红蛋白变异、药物反应、重度感染、血管内播散性凝血、输液反应、心脏瓣膜和HELLP（溶血、肝酶升高和血小板减少）综合症。图1 临床样本溶血的常见原因实验室检测过程发生溶血的后果由于溶血通常是在分离血清或者血浆之后才被察觉，因此是一个很难处理的问题，并且会对多种生化反应造成干扰。游离血红蛋白的增多通过升高选择性吸光度或者空白对照值而干扰浓度依赖的分光光度测定方法的结果，尤其是测定与415、540和570 nm接近的吸光度时。除了血红蛋白，红细胞中的多种结构蛋白、酶类、碳水化合物也可以也分析试剂相互作用或者竞争。溶血可以使以下测定指标的结果呈线性增长：谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐、肌酸激酶、铁离子、乳酸脱氢酶、脂酶、镁、磷、钾和尿素；可使以下测定指标数值下降：白蛋白、碱性磷酸酶、胆红素、氯化物、γ-葡萄糖甲基转移酶、葡萄糖和钠。红细胞中的多种酶类的释放、损坏或者其他物质都可以通过与抗体或者化合物发生交叉反应而对免疫测定结果造成影响。目前为止溶血能够干扰的特异性检测包括：降低肌钙蛋白T的水平，升高肌钙蛋白I和前列腺特异性抗原的水平，使VB12、睾酮和皮质醇检测可以出现假阴性结果，使胰岛素、胰高血糖素、降钙素、甲状旁腺激素、促肾上腺皮质激素和胃泌素降解而无法测定。此外，红细胞中叶酸盐的含量是血清中的30倍，发生溶血的样本无法正确检测。有报道溶血可使荧光偏振免疫测定法和结合珠蛋白检测出现假阴性结果。溶血的存在还会显着影响几种凝血试验，由于红细胞内凝血激酶的释放，使凝血酶原时间延长0.5%、纤维蛋白溶酶片段（D二聚体）浓度增加2.7%，活化部分凝血激酶时间显着缩短，抗凝血酶浓度显着下降。怎样预防溶血样本实验室检测的假性结果由于存在多种人为因素影响血液样本的质量，因此主要的预防措施就是建立样本采集和送检样本评估的指导原则或者建议（图2）。在实验室人员教程和测试内容中加入关于溶血造成检测指标干扰的详细知识，并对抽血人员进行适宜的培训也是减少实验室错误的主要措施。主要的教程内容应包括：使用常规管径针头和真空取血管，对带有导管的重症患者或者静脉细弱的患者谨慎取血，避免从血肿部位取血和延长止血带作用时间，不要大力搅动样本并在合适的温度和湿度条件下取血，此外，还应掌握标准的运输、保存、离心、分离上清的条件和方法。第二个重要措施是明确样本溶血的存在并明确其溶血程度对检测结果的影响。现代实验室技术允许我们应用分析前模型和测定仪以及自动分析软件对较宽范围的分析干扰进行校对。建议对肉眼无法觉察的但会对检测结果造成影响的溶血样本（血清血红蛋白＜0.6g/L，ALT、LDH、钾和钠检测）测定前应用这种校准技术。与此不同的是溶血可以造成分析方法受到干扰的情况，这种情况下仪器/试剂生产商应该提供溶血对每一种检测所造成干扰的资料。但是，如果说明书信息模糊，建议操作人员在实验室进行验证试验。通过对比来自于个体间和个体内的参考文献的结果和非溶血样本的结果确定某一测定方法可以接受的整体允许误差和分析质量标准。一旦确定了溶血样本，可采取以下三种措施：①溶血样本的数据校准；②针对某些适应证报告检测结果溶血中可能造成的干扰（描述性说明）；③使医生提高警惕并重新采集样本。结论溶血一直是各地临床实验室非常关注的问题，它是引起分析前差异性的主要原因，可以导致多种检测指标的假性结果。很多情况下提高样本的采集和处理可以避免溶血的发生，收集地区医疗保健机构的溶血相关数据可以为检测溶血样本的校准和评估提供信息学资源。相信在各地临床机构、实验人员和医生谨慎操作、全面分析和广泛讨论的气氛中，溶血发生率和影响患者诊治的错误检测结果出现率都会明显下降。

Ⅱ 激活凝血时间的原理

凝血时间测定原理
新鲜血液离体后，因子被异物表面（玻璃）激活，启动了内源性凝血。由于血液中含有内源性凝血所需的全部凝血因子、血小板及钙离子，血液则发生凝固。血液凝固所需时间即为凝血时间（clotting rime，CT）。

毛细血管采血法：可用玻片法或毛细血管法测定。由于采血过程易混入较多组织液因而即使有内源性凝血因子缺乏，也仍发生外源性凝血，使本该异常的结果变为正常。本法极不敏感，仅能检测出Ⅷ：C水平<2%的血友病患者，漏检率达95%故属于淘汰的方法。

静脉采血法：由于血液中较少的混入组织液，因此对内源凝血因子缺乏的第三性比毛细血管采血法要高。目前有3种检测法：
（1）普通试管法（Lee-White法）：仅能Ⅷ：C水平<2%的患者，本法不敏感目前也趋于淘汰。
（2）硅管法（SCT）：本法与普通试管法的测定方法基本相同，唯一的区别是采用涂有硅油的试管。由于硅管内壁不易使内壁凝血因子接触活化，故凝血时间比普通试管法长，也较第三可检出因子Ⅷ：C水平<45%患者。
（3）活化凝血时间（activatedclotting rime，ACT）法：本法是在待检全血中加入白陶土部分凝血活酶悬液，先充分激活接触活化系统的凝血因子Ⅶ、Ⅺ等，并为凝血反应提供丰富的催化表面，从而提高了试验的第三性，是内源性系统第三的筛选试验之一，能检出Ⅷ：C水平<45%亚临床血友病。ACT法也是监护体外循环肝素用量的较好的指标之一。
以上测定凝血时间的各种方法，在检测内源性凝血因子缺乏方面，无论敏感性或准确性均不如活化部分凝血活酶时间测定（APPT）。

Ⅲ 出凝血时间的注意事项

PT,APTT凝血实验检查均使用静脉血.采血人员应技术熟练,以防止组织损伤,外源性凝血因子进入针管. 2.凝血实验标本最好不与其他实验一起采集,否则由于标本的分配,分装等使用血液停留在针管的时间延长.一般血液采集,进入 容器至进行实验所用的时间越短,所分析的凝血因子被保护得越好.从输液三通管取出血的做法不可取.
3.取血时病人应松弛,环境温暖,防止静脉挛缩,止血带的压力要尽可能小,压力大及束缚时间长可影响局部血液的浓缩和内皮细 胞释放组织纤溶酶原活物(t-PA),后者将引起纤溶性增强,血小板短和内径应标准化,国际上推荐用21G1.5或20G1.5 针头.取血时,拉针栓的速度要慢而均匀,使血液平稳地进入注射器,防止气泡的产生.
4.一旦取样完毕,立即与抗凝剂充分混合,一般提倡使用真空采血管.此管有充分的透明度,根据取血量设计,有2.0,5.0 ,10ml各种血液收集管,真空负压并有定量的抗凝剂,能保证抗凝剂与取血量的比例,且能有充分的空间便于血液和抗凝剂混合.
5.用硅化玻璃或塑料注射器采血.考虑结果的精确性,应将试管刻度的可能误差控制在既定体积的10%以内.
6. 采血后标本在低温保存且在一定时间范围内.笔者曾对不同条件保存的血浆因子变化进行了探讨,结果显示在32℃保存血浆6,12, 24hⅧ因子活性可分别消失50%,60%95%,即使保存在4℃也分别消失5%,55%,70%.V因子活性在32℃分别消失 25,40,80%,而在4℃则仅损失0%,5%,10%.因此测定APTT的血浆在-80℃至少可保存1个月,4℃为6h,2 0℃为6h,而32℃仅为血浆,在4℃为24h,20℃为6h,32℃为2h.
7.国际血液学标准化委员会(ICSH),国际血栓与止血委员会(ICTH)推荐使用3.2g/dl(含2H2O)或0.109mo l/L的枸橼钠作为凝血因子检查的抗凝剂.另外,近年来,许多试验室采用缓冲抗凝剂,这种试剂对标本经冷冻保存后再行分析更为适 宜.因为无缓冲剂,血浆pH值随时间而增加,凝固时间可延长,特别是Ⅷ因子即使是在-20℃保存,其凝血活性也可减少50%.缓 冲剂的作用是维持血浆恒定pH,防止易变因子失活.抗凝剂在血标本的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度,进而影响试验结果,一定要 注意采血时血液与抗凝剂的比例.应指出,所谓血液与抗凝剂按9:1比例混合,实际上是指抗凝剂与正常压积血液之间的比例而言.因 此应根据患者红细胞比例(Hct)状况随时调整抗凝剂用量. 1. 凝血活酶应注意的问题:
(1)组织凝血活酶标准化应用的国际参考品(international reference preparation, IRP),有下列几种:单一组织凝血活酶国际参考品:是一种组织提取物的生理盐水悬液制剂.WHO在英国使用的统一标准的英国 比较凝血活酶,编号67/40.同时又以BCT67/40为基础标准化了次级参考品.如牛脑组织凝血活酶,编号68/434; 兔脑为70/178等.复合组织凝血活酶国际参考品:它是组织提取物的生理盐水悬液中加入适量纤维蛋白原,因子V和氯化钙组成的 制剂,如牛组织凝血活酶OBT/79等.
(2)组织凝血活酶工作制剂的国际敏感指数(ISI),由于不同组织凝血活酶对凝血因子 的敏感性不同.为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测PT中能得到同样的结果,必须要制定一个共同的敏感性指标.自制的试剂要与 国际参考品(IRP)进行比较,然后得出一个校正值(即ISI).ISI值越接近于1.0,表明组织凝血活酶试剂越敏感,因此, 生产和出售得产品必须标有ISI.
(3)仪器特有的ISI:上述PT根据报告方式适用于手工法(试管倾斜法)测定PT.但是手工 法与仪器法以及仪器法与仪器法测定PT的国际标准化比值(INR)之间,仍有差异.为此,专家们提出建议:同一组织凝血活酶试剂 用于不同仪器时,可用所谓的仪器特有的ISI或称区域性ISI来计算INR.每台仪器所用的凝血活酶试剂都应该有特定的IS I值,重新标定ISI值的做法是购买标有INR的冻干血浆,然后在自己的仪器上再标定所使用凝血活酶试剂的ISI值,这样才可使 病人的INR具有可比性.
(4)某些凝血活酶和部分活化凝血活酶并不一定与某此仪器相匹配.浑浊的或含微粒的凝血活酶和部分活化 凝血活酶不能运用通过光学系统测定终点的仪器进行检测.
(5)凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步骤必须严格按照说明书进行.通 常在使用前必须充分混匀试剂,以使微粒重新均匀悬浮于液体中.按说明书要求的温度存放试剂,并且试验过程中,将试剂置于37℃下 的时间不能长于说明书中规定的温度.
(6)做APTT实验时所用的活化剂不同,对血内肝素,狼疮抗凝物质及因子Ⅷ,Ⅸ缺乏症的敏 感性也不同,要根据检测项目来选择不同活化剂的APTT试剂.同样PT延长时反遇有关凝血因子中单一因子或几个因子缺陷引起的病 理现象,由于不同疾病可能仅反映某一因子的变化,因此一种特定试剂不可能对这些疾病的变化的敏感性一致.由于不同厂家生产的PT 试剂质量不同,因此,同一份标本用不同PT试剂其结果可有明显的差异.因此PT实验最好采用INR的报告方式.
2. 试剂准备过程中应该使用去离子水.如果pH值增高的水没有得到适当的缓冲,将会延长测定结果.如果用含氨的水配制抗凝剂,会导致 V因子活性快速降低,从而延长凝血酶原时间.凝血活酶,部分活化凝血活酶,缓冲液和抗凝剂须在4-10℃条件下贮存,但在室温下 保存氯化钙和水.
3. 正常对照血浆通常将多份健康人血标本混在一起,以弥补个体误差.正常对照血浆要求20份以上健康,年龄在18-55岁间的男女个 体,且删除服药者,须在平静,休息状态抽血.样本离心取出血浆后混匀,分装小瓶,冻存于-80℃备用,或冷冻干燥.
4.参比血浆:标准化是质控的重要组成部分,方法标准化对有的实验室来说是困难的,因有设备条件方面的限制.为了使结果大同一实验室 的不同时期具有可比性,必须使用标准品或参比血浆.WHO已建立了10多种国际标准品. 1.玻璃器皿的要求:贮存和测试时应选用干净,没有划痕的试管.酸清洗法(盐酸3mol/L)被公认为适用于凝血研究清洗玻璃制品的 最佳方法.玻璃制品必须通过彻底冲洗,以去除残留的酸,避免改变容器表面的pH值.一次性玻璃和塑料制品分开保存.手工法PT或 试管法全血凝固时间测定时,试管口径为8mm,直径越大,CT越长.
2.温度的要求:人工测定终点法要求水浴箱的温度必须保持在(37±1)℃,并且周围照明设备要好,便于读取终点.如果为了读数而将 试管从水浴箱中拿出,倾斜观察,此时动作应迅速,否则试管中的血浆温度将很快下降.
3.仪器的选择:自动终点测定法有半自动和全自动两种类型,区别在于前者在试剂和血浆移液步骤上仍是手工的;而后者完全由仪器自动操 作.自动终点法测定所得结果重复性好,大大提高了不同试验室结果间的可比性.
应该根据仪器的精密度,可靠性,使用和维修的简易程度来选择所购买仪器.现在已有不少用合成底物法代替以凝固为终点的生物学测定 法的报道.但是,这两种测定方法的临床意义不尽相同. 1. 许多试验误差都来源于技术的错误.在实验技术,试剂,温度及pH值上很微小的变化都会导致试验结果明显的变化.孵育时间与温度是 在一期法凝血酶原时间测定时应严格控制的参数.血浆不能在37℃下放置超过10min,凝血活酶放置时间也不能超过说明规定的时 限.
2.手工法PT或试管法CT检查时,倾斜试管动作一定要轻,角度要小,以减少血液与管壁的接触面积.同一标本要做二管(有文献报告试 管法CT检查要3管)并取均值报告.每批实验必须有正常对照.
3.血液凝固主要是酶催化的反应,所以实验过程中要严格控制理想的pH环境和溶液的离子强度.多数常规试验都在处于血液生理pH值缓 冲范围的缓冲系统中进行.反应混合物的pH值必须处于7.2-7.4之间.
4.试验结果准确还取决于所用的反应物的量,加入顺序和不同反应物的孵育时间.如每次APTT试验时,活化部分凝血活酶试剂和血浆混 合物的孵育时间必须一致. 混匀过程决定了APTT试验中接触活化的量,在孵育时如果在活化部分凝血活酶与血浆混合的技术不佳,将会改变测定结果。
5. APTT,PT需乏血小板血浆.一般3000r/min离心10min后分离血浆.离心前注意标本量,离心后注意血浆的量(Hc t)以保证抗凝剂与标本量最适比例.
6. 试验前检查血浆是否有溶血,黄疸,脂血和出现凝块.红细胞膜含有磷脂,溶血标本具有与血小板第Ⅲ因子(磷脂)相似的凝血活性,这 种磷脂能缩短溶血血浆的APTT值.标本中如果出现凝块,无论凝块多么小,均会影响试验结果.
7.报告方式:(1)以PT的秒(s)数报告.(2)以患者PT(s)/正常对照(s)的比(PTR)报告.(3)在口服药物治疗监 控时以INR报告.(4)ICSH规定,不再用百分比(活动度)报告.(5)APTT以秒报告。 绘制质控图并随时分析其变化趋势是质量控制的重要手段.在每天工作中,同时测正常和氨基常对照血浆(商品或自制),并用Le vey-Jeuny质控图检查有无失控.其步骤为,首先在常规的实验条件下(包括高素质的实验人员,规范的操作,稳定的仪器), 对质控品至少进行10次测量,计算出X及标准差,然后绘出质控图,质控物的X值为基线,纵轴有X±2s.每次试验时质控物与标本 一起检测,并把当日的结果点在图表上.下列的质量变化图形有利于操作人员判断结果是否有所失控.当失控时,按下述步骤(图1)检 查原因.
室间质评:各实验室必须积极参加由检验中心组织的室间质评活动,以便了解本单位的结果准确性,因仪器和试剂不同,同一份质控 血浆可行到不同结果,应将回报结果根据仪器试剂分组比较.

Ⅳ 生物:斐林试剂为什么要现配先用且不能放置太久

现混现用主要是要新制的Cu(OH)2，Cu（OH）2很容易沉淀析出，久制的氢氧化铜完全沉淀，反应会很慢甚至发生不了。

斐林试剂，它是由氢氧化钠的含量为0。1g/mL的溶液和硫酸铜的含量为0。05g/mL的溶液，还有专含量为0。2g/mL酒石酸钾钠配制而成的属，其本质是新配制的氢氧化铜。

斐林试剂A液和斐林试剂B液反应生成斐林试剂。检测还原糖时，A液和B液必须反应完全后再加入待测样本里，而且必须是现用现配。

因为硫酸铜和氢氧化钠放在一起会产生氢氧化铜沉淀，所以现配置的斐林试剂才能不使两者反应完全，时间长了都变成沉淀就没效果了。

(4)凝血样本为什么不能放置太长时间扩展阅读：

斐林试剂是公元1849年由德国化学家赫尔曼·冯·斐林制作出来，可以用来区分水溶性的醛及酮官能基，也可以用来测定单糖。

斐林试剂可以用于鉴定含有羰基的化合物是否为醛或酮。试剂中的二价双酒石酸盐负离子螯合物为氧化剂和此检测中的活化剂。若化合物中具有醛基，则会被氧化呈阳性反应，此外除具有α-羟基酮官能基的化合物，其他酮类皆不与斐林试剂反应。

该反应原理是二价双酒石酸盐负离子会去氧化羧酸阳离子，在这个过程中螯合物的中央二价铜离子被还原成为一价铜离子（即发生了氧化还原反应），形成砖红色的氧化亚铜沉淀，此即斐林试剂的阳性反应结果。反之，没有发生沉淀则为阴性结果。

Ⅳ 标本放置过久会对生化的哪些检验项目产生影响有什么影响

需要看是什么标本，血离子标本放置过久会使钾离子升，分离胶管贮存的血标本再离心致钾离子增高。严密控制标本误差因素。

标本处理方法可以采取整个个体（甚至多个个体，如细菌、藻类等微生物，或像真菌等个体小且聚生一处者），或是一部份成为样品，经过如物理风干、真空、化学防腐处理等处理可制成。

(5)凝血样本为什么不能放置太长时间扩展阅读：

在制作标本前，必须先将昆虫的内脏取出，便于针插后能迅速干燥。但像蜻蜓中的豆娘那样身体极细的昆虫，则可不必去除内脏。

解剖时，可用镊子直接从虫的颈部和前胸背连接膜处插入，取出各个脏器。或在腹部侧面沿背板和腹板的连接膜处剪开一个口子，然后用镊子取出脏器。

接着用脱脂棉捏成一长条状的棉花栓，用镊子将其慢慢的塞入已掏空的昆虫腹腔内，保持虫体原来的体形。

Ⅵ 血常规检查 样本凝血 为什么

最多见的是没有与抗凝剂充分混匀，有时候与病人的血液有关

Ⅶ 凝血因子常温下放置多久不能用

理论上2－8度保存2年，常温下缩短为3个月。也不是绝对不能用，是降低到标定值的80%以下了。个人可以用，但医院就不敢用了。

Ⅷ 酒驾血液样本存放时间

保存期限是48小时。血液样本如果放置超过两天，血液中的酒精就会因为而挥发就会降低酒精的浓度，那么排查出来的结果就不会特别准确，因此，在48小时内应当有化验结果，如果没有出化验结果，应当重新抽取酒驾人员的血液。
取样：因醉驾抽取的血样一般取两份，一份送检，一份备案，备案血样主要在需要时作DNA鉴定和酒精含量的再鉴定。
血样保存：酒驾血液样本存放在低温环境中，血袋需排除空气，并加防腐剂。
保存时间：送检的血样鉴定报告出来后，公安机关需作出鉴定结论送当事人确认并签字，拒绝签字的应注明情况。鉴定结论是给醉驾者定罪的最重要的依据，所以公安机关在血样送检到送达鉴定结论的过程中，都需要遵循严格的程序。遵循严格程序因而不能形成证据链条的不能定罪，所以在醉驾者一审服罪或二审裁定前不能将备案的血样销毁。

Ⅸ 细胞可不可以固定后放置一段时间再做免疫荧光

这个没有绝对的.取决于你的试验方法和目的.一般来说,固定后,把样本再转移到保存液中,可以大大延长保存的时间.
为了保护抗原表位,建议你使用新鲜配置的多聚甲醛来固定.固定后立刻转移到5%BSA的PBS溶液中（最好放防腐剂）,可以在4度保存一段时间.
当然,样本长时间保存,肯定对结果会有不好影响.至于影响的大小,你要做一个时间曲线来证明.以后就心中有数了.

Ⅹ 鹿茸血为什么不能久放能放多久

鹿茸不宜长时间放在冰箱里,药材放入冰箱内，和其他食物混放时间一长，不但各种细菌容易侵入药材内，而且容易受潮，破坏了药材的药性，所以对一些贵重的药材，如人参、鹿茸、天麻、党参等，若需长期保存，可放在一个干净的玻璃瓶内，然后投入适量用文火炒至暗黄的糯米，待晾凉后放入，将瓶盖封严，搁置在阴凉通风处。 鹿茸的保存要特别小心，首要的是要注意空气湿度问题，如果空气太潮湿，鹿茸就容易发霉，接着就会生虫。所以首先要把鹿茸放在一个通风的地方，然后用布包一些花椒，放在鹿茸旁边，这样就不会招虫了。如果保存得当，三五年内，鹿茸的药效是不会发生变化的。