细胞培养到一定时间为什么要传代
‘壹’ 为什么培养细胞长成致密单层后必须要进行传代培养
因为正常细胞具有接触抑制现象,
如果不分瓶培养,
就会导致细胞停止分裂,
最终衰老死亡。
细胞膜上有糖类和蛋白质共同构成的糖蛋白,也叫做糖被,
它在细胞上起识别作用。
当细胞增殖到一定程度,
也就是互相挨在一起的时候,
糖蛋白识别了这种信息,
就会使细胞停止继续繁殖。
请参看接触抑制
http://ke..com/view/472342.htm
‘贰’ 细胞第一次传代时间
正常细胞培养时,不论细胞的种类和供体的年龄如何,在细胞全生存过程中,大致都经历以下三个阶段:
1.原代培养(Primary Culture)期:
也称初代培养,即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段,一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动,可见细胞分裂,但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞群是异质的(Heterogeneous),也即各细胞的遗传性状互不相同,细胞相互依存性强。如把这种细胞群稀释分散成单细胞,在软琼脂培养基中进行培养时,细胞克隆形成率(Cloning Efficiency)很低,即细胞独立生存性差。克隆形成率即细胞群被稀释分散成单个细胞进行培养时,形成细胞小群(克隆)的百分数。初代培养细胞多呈二倍体核型;由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大,是检测药物很好的实验对象。
2.传代期:
初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系(Cell Line)。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下,细胞增殖旺盛,并能维持二倍体核型,呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系(Diploid Cell Line)。为保持二倍体细胞性质,细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。当前世界上常用细胞均在不出十代内冻存。如不冻存,则需反复传代以维持细胞的适宜密度,以利于生存。但这样就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代10~50次左右,细胞增殖逐渐缓慢,以至完全停止,细胞进入第三期。
3.衰退期:
此期细胞仍然生存,但增殖很慢或不增殖;细胞形态轮廓增强,最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段,少数情况下,在以上三期任何一点(多发生在传代末或衰退期),由于某种因素的影响,细胞可能发生自发转化(Spontaneous Transformation)。转化的标志之一是细胞可能获得永生性(Immortality)或恶性性(Malignancy)。细胞永生性也称不死性,即细胞获持久性增殖能力,这样的细胞群体称无限细胞系(Infinite Cell Line),也称连续细胞系(Continuous Cell Line)。在早期文献中无限细胞系也称已建立细胞系(Established Cell Line),现已不用。无限细胞系的形成主要发生在第二期末,或第三期初阶段。细胞获不死性后,核型大多变成异倍体(Heteroploid)。细胞转化亦可用人工方法诱发,转化后的细胞也可能具有恶性性质。细胞永生性和恶性性非同一性状。
‘叁’ 关于动物细胞培养,为什么细胞遗传物质的改变发生于传代培养过程
它在原代培养的时候经过50代左右就该死了,不想死的就突变了,不突变就没有传代培养了,你也不会提这个问题了
‘肆’ 为什么要进行传代培养
传代培养通常是动物细胞培养才会用到的名词,在植物组织培养过程中称为继代培养。通常植物组培的目的是快繁,所以需要继代产生大量中间繁殖体再进行再分化培养产生植株。
传代培养是指需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程。对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
传代方法:
1、悬浮生长细胞传代
多采用离心法传代。1000转/分,20-30秒后去上清。沉淀细胞加新培养液后再混匀传代。亦有直接传代法,即悬浮细胞沉淀在瓶壁时,将上清培养液去除1/2-1/3,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2、半悬浮生长细胞传代(Hela细胞)
此类细胞部分呈现贴壁生长现象,但贴壁不牢,可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来,进行传代。
3、贴壁生长细胞传代
采用酶消化法传代。常用的消化液有0。25%的胰蛋白酶液。
‘伍’ 在动物细胞培养中进行完成原代培养后为什么要进行传代培养
获得高度统一性状的细胞
‘陆’ 细胞培养扩大为什么要传代5到6次
一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒
‘柒’ 为什么细胞培养一段时间后 变成长梭形
有几种可能性:
1.可能是所用的培养液用的时间太久,里面的必须营养成分谷氨酰胺缺失------配制好的培养液在4度冰箱放置两周后,大部分谷氨酰胺就已破坏,在缺少谷氨酰胺时会出现细胞生长不良等现象.以前我养的细胞也出现过纤维化 变脏等现象,我换成新鲜培养基后它就变好 了.
2.PH值不合适.比如原来生长条件是一个PH,现在改变较大.
3.传代时细胞密度太小.有些细胞在相互接触状态下长得比较好.
你可以改用新配制的培养液,并把细胞传密些先养养试试.
‘捌’ 肿瘤细胞培养多长时间换一次培养基,即传代一次
一般三天换一次培养基,当然如果培养基的颜色变黄了就立即换培养基.传代看细胞覆盖率,覆盖率达到80%-90%就可以传了,癌细胞一般1传5.
‘玖’ 癌细胞培养到一定时期不传代培养也能无限增殖 对吗
培养的每个时期都是不传代也能无限增殖啊 传代只是因为你培养基里面的营养物质消耗完了 细胞长的太密了
‘拾’ 细胞培养到什么状态就可以传代了如果要加药得到什么状态
细胞传代实为细胞分瓶。单层贴壁生长的细胞一般是接近汇合或100%汇合后进行传代,有些呈克隆样或成堆生长,永远也达不到汇合,应根据经验,在细胞密度最高时传代。还有些具有接触抑制的细胞,要在汇合前进行传代。