为什么有的pcr同样的东西都不一样

1. PCR的时候用普通Taq酶能P出的东西，为什么换了高保真酶之后，同样的循环条件为什么P不出条带

不同的酶反应条件不一样呗，其实实在做不出来也不用去瞎折腾了，找公司做也可以的，威斯腾就不错。

2. 菌落PCR产物检测大小对的,可送去测序结果就不对，不是我要的东西，这是为啥呢

条带是特异性的么？
如果是引物特异性的问题，应该有许多的杂带。
可以把PCR产物再P一次，看是否还有条带
或者换个体系重P一次

3. 做PCR的时候为什么同样的东西同样的操作，结果就是会不一样呢，有时候连带都不出，

检查仪器，或者其他什么原因！或者是某些步骤没作到位，做理学实验就是这样！要有耐心，要不然不天天有人拿诺贝尔，生物实验可能N个实验才成功一个！

4. 我做PCR为什么筛温度的时候都能P出条带，等到筛好温度了却没有条带了　而且做了两次反复　相同的东西

PCR的模板或引物比较复杂时，各种怪事都会有。
如果你的实验体系没问题，你可以试试先以较高退火温度p上5个循环，再以你筛的温度p上30个循环。
或者把你的目的条带切胶回收，稀释后作模板再p。

5. 我最近做PCR，目的条带是321bp，但是我扩出来的阴性对照都有条带，而且和样本条带扩出来的一样

最大的可能就是污染了呗，PCR配体系与加模板时都要戴口罩手套，外加最好不要再你们常做实验的地方加这些东西，空气中极有可能有相应模板气溶胶存在。

6. PCR相关的问题

我觉得根据你说的，就有一种可能啊，就是你的模板降解了。这个基因比较难扩增，所以对模板的要求比较高。引物应该很少降解，而且你以前也做出来了。

我建议你除了引物和模板全部换成你们隔壁实验室的试剂，连pcr仪最好也用别人的试试，因为什么都有可能坏，而且你trouble shooting的时候没有做positive control，怎么知道不是你的dNTP或者polymerase坏了，所以之后的实验一定要做positive control。如果还不行，重新制备模板，引物一般没有问题，祝你成功

好吧，照你说的，每个环节都没有问题了，那估计是引物的问题了，但是我没有碰到过这样的情况，所以没有感性认识啊，照常理说，什么东西都一样，出来的结果不同，想不通。。。

7. 为什么我的PCR产物有一半能跑出来啊还有一半什么都没有做了2次都这样。

楼主能不能说的具体点
PCR是个敏感的体系，做不出来很正常。我不知道楼主你为什么认为你另外5个样本应该一定可以扩出东西，难道你做了10组重复？你那些样品跟扩出来的比模板，引物，酶，退火温度，循环数等参数都是一样的？
有时候就是这样，用同样的体系扩增同样的东西还会出现不同的结果，就看你用PCR做什么了，如果是验证性实验，你最好优化一下体系，实在不行换个人做一做，也许就峰回路转了。
祝福楼主啊！

8. 我的质粒做PCR，第一次很成功，但后来同样的试剂和条件就再也不成功了，高手们救命啊

这个？PCR太考验人品了。多做几遍吧

9. pcr同样的东西同样的温度，怎么小片段扩出来了，全长就扩不出来

本来小片段就比大片段好扩很多。
增加延伸时间和反应数，得到微量的全长，再p一次。

10. 相同引物荧光定量PCR与普通PCR扩增出来的片段大小是否相同

啥跟啥
啥叫说明书结果为238
同样的引物同样的模板在同样的条件下p出来的东西肯定一样
当然也可能引物的特异性不好
荧光的和普通的退火温度不一样
出来的东西不一样
测序一下就知道了