为什么蛋白条带颜色浅
⑴ SDS-PAGE跑了4、5回了,条带颜色总是特别浅看不清楚,连MARKER都看不清楚,是怎么回事啊
1 上样量太少,或者电泳时候loading buffer不行,导致蛋白跑了
2 脱色时间不够,建议K-G染色后,脱色液在30min内换两次
3 重新按标准配置电泳缓冲液。
⑵ 请问各位朋友,pcr产物条带很淡,是什么原因有哪些好的改良方法谢谢
引物、模板没问题的话,就加cycle,多扩几轮,就亮了。(一般pcr酶和buffer是没有问题的,除非你反复冻融或者长时间放置室温)
如果上一轮扩出来特异性好的话,可以适当降低退火温度。
多扩了几轮,,退火温度也降低了,但是条带仍然很淡,这时候,基本上就是引物和模板的问题了。你要好好看看引物特异性好不好,dimer亮不亮,(自身发夹一般不会有太大影响);模板的话,要看看GC含量高不高,模板质量好不好。
引物不好只能重新设计。模板不好可以加点DMSO(GC含量高),或者重新提取。
差不多就这几个方面吧~
⑶ PCR电泳,加样孔很亮,但目的条带却很淡,不知道怎么回事
你的MARKER是对的,说明胶的问题不是很大(但也可能是影响因素)。
可能的原因是:(1)DNA不纯,里面蛋白质过多。
(2)梳子非常不干净,有杂质在点样孔里
(3)胶的浓度(过大或过小)不适合你的PCR产物
⑷ 醋酸纤维薄膜上条带的数目、位置、粗细和颜色深浅分别与哪些因素有关
数目与蛋白种类有关,位置与各蛋白等电点大小(电泳速度)有关,粗细与蛋白相对分子质量有关,颜色深浅与含量有关。
⑸ 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验电泳条带为什么有宽有窄有浓有淡
sds-page电泳泳道一般不会很宽的,因为用来形成泳道的梳子都是固定大小的,只有电泳时条带可能会变的很宽这个是因为上样体积比较大的时候,比如上满整个泳道的时候,因为浓缩胶体积小,未能将样品完全压成一条线,在分离胶的时候条带就容易扩散。
所以电泳时条带可能会变的很宽另外就是电流电压的影响,一般只需要降低电压,条带就不会变的很宽sds-page电泳跑出竖条带多半是配胶的原因如果胶配制的时候没有搅拌均匀,就有可能在胶浓度较高的地方出现条带变成竖条带,所以sds-page电泳跑出竖条带应该会死配胶的原因,建议充分搅拌均匀。
(5)为什么蛋白条带颜色浅扩展阅读:
注意事项:
在光滑面点样。醋酸纤维薄膜有两面,一面有光泽,一面无光泽,无光泽面才是实验要求的点样面,操作时必须认真加以区别(有光泽的一面发生的是镜面反射,无光泽的一面发生的是漫反射,以此可以区别)。若点样错误地点在有光泽面上,带电的蛋白质就不可能在薄膜上移动,也就不可能有五条区带。
点样用力不均匀或样品涂在玻片时不均匀。点样用力不均匀的结果是,样品有的点上去了,有的没有,这与取样涂在玻片不均匀相关。在血清中有的样品的量比较少,没点样上去导致不能形成区带。
⑹ 电泳图谱中,蛋白条带的颜色深浅和宽度表示什么
你好,电泳图谱中颜色深浅代表含量高低,宽度与蛋白样品的不均一性有关,含有不同分子量的蛋白种类越多弥散宽度越大。希望采纳哦
⑺ western blot条带很淡是什么原因
很多种可能~~有可能是抗体的问题,也有肯能是你显色时候显色剂的问题,也有可能是转膜的时候没转过来或者电压太大时间太长转过了,露走很多。可以多做几次,自己查找原因,祝你成功哦。
⑻ 电泳蛋白质条带颜色浅,marke的颜色也很浅,那蛋白质样液可以浓缩吗!
M颜色也浅的话应该是胶的问题了,可以适当提高一下浓缩胶的浓度
⑼ SDS-GAPE实验为什么要先调整蛋白质浓度既然浓度相同,为什么处理组的条带和对照组相比会整体变浅
可能定量的过程不准。从图中看对照组蛋白量明显大于处理组。你再看看非预染marker的说明书,上面会标明各带的浓度,一般是0.1mg/ml,相较而言处理组的蛋白浓度根本没有达到 3mg/ml。