elisa为什么不显颜色
1. 为什么elisa试验双抗体夹心法阳性对照没有显色
双抗体夹心ELISA,阳性孔,样品孔和阴性对照全部不显色
已经单独用二抗和显色液加一起试过了,显色很明显的,二抗是新换的,二抗和显色液没有问题
根据你的实验结果可以推断,结果没有显色是因为包板的抗体失效,很明显。另外,抗体在4度放几个月没有问题是因为无菌操作的情况下,而且保证冰箱没有任何问题的情况下。另外,可以验证一下你没有包被的抗体,直接点膜做DOT-ELISA,一天肯定出结果。
2. ELISA法显色原理是啥
正相反。一般酶和抗体是化学键连接的。阳性对照中,抗体和抗原结合导致抗体的固定化(也就是说结合到板子上了),与抗体连接的酶就一并固定化了,所以再往酶标板中加入底物,酶就发挥作用显色了。阴性对照中,抗原没有,所以抗体不能固定化,随之没有酶的固定化,所以加入底物不显色。
3. ELISA实验无效的几种原因
原因:
1. 不同试剂盒或不同批号的试剂混用
2. 标准品稀释方法错误/或标准品有
3.未加酶结合物而认为已加入
4.终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用
5.显色液变质
6.洗涤液配制有误
方法:
1.建议使用同批次试剂盒。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂。
2.请按照说明书所示配置说明书,注意单位和稀释倍数
3.注意不要漏加
4.每次加液前均应看清标签。
5.更换新的显色液。
6.请按说明书所示稀释倍数配制
总结以上避免白板,ELISA操作应注意事项:
1、确认配制洗液的容器已洗干净,不含酶抑制剂,如叠氮钠等;
2、每次配制时都应看清标签标明物质;
3、加完试剂后可观察一下液面高度是否一致,以减少漏加现象。
4. 各位大侠帮帮忙。我是个新手,在做莱克多巴胺ELISA试剂盒时,加入底物A、B后不显色,这是为什么愁啊
这个原因老多了。你装酶标抗体,显色液A和B,三种混一起看是否显色,如果不显色,那就是显色液或者酶出问题了。换掉一种再试。
如果能显色,那就是抗体系统出问题了。这个就比较麻烦。如你浓度太低,抗原与抗体不反应,包被出问题等等。
5. ELISA不显色的原因有哪些
先做下排除实验。1.直接加亲和素标记的碱性磷酸酶是否显色?如果没问题接着做下一步2.直接包被二抗是否显色
6. ELISA为什么所有孔都完全没颜色
如果你确定是步骤没有问题的话,不显色的因素很多,要一一排除。假如是二抗或者显色液的问题,可以用二抗和显色液混合看是否显色,每个因素逐一排除。我们的ELISA检测抗原或者抗体的步骤是这样的,你可以做个参考:包被好抗体的板条,加入待测样品,孵育后洗涤拍干,加入酶标抗原孵育后洗涤拍干,加入显色液显色。
7. 连续做了两边ELISA,为什么会不显色
可能包被出现问题,可以包下抗原试试 或者将一抗生物素化,包亲和素,再加生物素化一抗 抗原 二抗