熒光定量軟體的ct值為什麼會變
Ⅰ 最近做熒光定量PCR實驗，濃度梯度之間的CT值相差還不到1，這是什麼原因小弟初次做這實驗，不太了解，請
CT值與濃度之間不是相差1的關系，而是一種線性關系。要根據你的CT 和濃度的關系來確定。
Ⅱ 熒光定量PCR檢測時的CT值怎麼確定的
高於背景熒光強度的值被確定為閾值。
CT值：C代表Cycle，T代表閾值(threshold)，CT值的含義是：每個反應管內的熒光信號到達設定的閾值時所經歷的循環數。控制在擴增曲線的指數增長階段范圍之內。閾值線與擴增曲線的交叉點確定CT值。具體見附圖。
Ⅲ 做熒光定量時 擴增曲線和溶解曲線都很好 沒有出現二聚體 但是為何目的基因的ct值大於30 ，在31左右。
朋友，首先跟你說一下我的經驗，其實這里有個誤區，其實普通PCR對Realtime
PCR的指導意義實在是太小，因為realtime
PCR的引物跟普通PCR的引物有很大差別，realtime
PCR的引物因為要顧及試驗體系的要求，所以在引物性能方面有一些犧牲，比如有時候要求180-200bp的擴增需要會犧牲一些性能，比如存在二聚體之類的東西。溶解曲線沒有明顯的峰說明沒有擴增產物，這裡面問題很多，比如溫度條件、引物條件等等，最好還是能夠找公司幫你設計引物，比如takara等公司，可以幫你設計引物。再有一個問題，你說你的模板稀釋倍數越來越小依然沒有產物，你覺得困擾，其實並不是像你想的那樣，按照你的思路，你擴增產物應該是豐度比較低的產物，這樣的擴增反應你認為模板量越大越好，其實不然，因為反轉錄buffer和realtime
buffer是不同的，而且反轉錄體系的一些組分能夠抑制realtime反應的進行，因此，可能你稀釋倍數越低，最後反而realtime反應的擴增效率越低，你可以嘗試把稀釋倍數高一些試試看，因為當時我在做實驗的時候確實在丁香園上看到有的戰友提到過這樣的問題，如果再有問題我們可以再討論，大家一起提高，希望能幫到你。
如果回答對您有用，請及時採納。
Ⅳ 熒光定量PCR的CT過小是為什麼啊，不是說基準線是3到15個循環，出現在這個基準線的ct原因是什麼啊
這是因為DNA復制量未達到儀器檢測到的水平，但實際PCR循環卻真實進行，反映在儀器曲線上為基線，直到量變達到質變時，才會被儀器檢測到，變成指數增長期
Ⅳ 實時熒光定量PCR CT值偏大的原因是什麼
CT值偏大是因為擴增產物量低引起的，而後者的原因很多，比如底物濃度低，引物效率低，有抑制反應的物質存在等等。
Ⅵ 熒光定量pcr中關於閾值的設置是否會影響Ct值
閾值和基線的設置肯定會影響Ct值，你可以採用每次反應完後軟體自己選定的閾值。你也可以手動調整，但是如果你是相同的模板，做不同反應，那你必須使兩次實驗的閾值和基線調到相同。使用相同的標准品，才能減小不同批次反應的誤差。
Ⅶ 熒光實時定量做標准曲線時,有兩個濃度的CT值一樣，為什麼會這樣如何改進
您可以使用2-ΔΔCT法的相對量，絕對定量標准曲線。
Ⅷ 求助關於熒光定量PCR的CT值問題
如果有標准曲線，按照標准曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta CT方法來計算。舉例如下：
對照組基因A的CT值為20， 內參（比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18，內參CT值14。
首先算加樣量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因A的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍，所以4處以2=2，最後的相對量是2倍。
幾點注意：
1。必須確定擴增的特異性
2。 只有相同目標的CT值才能相減（擴增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理論值，實際擴增效率低於2。
4。 最好不用Syber Green
Ⅸ 熒光定量的Ct值和Cp值的區別在哪裡
正常啊，定量PCR很靈敏的，體系稍微變化就會誤差很大，更何況你這樣反應體系都不一樣。所以一般定量結果只是作為佐證，最好別太相信。你想做好，就盡量保證每個體系是一致的，最後結果趨勢是一致的就行了。
Ⅹ 請問：做熒光定量PCR時，△△Ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼
△△Ct是熒光定量計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN/lg(1+Ex)，其中，n為擴增反應的循環次數，X₀為初始模板量，Ex為擴增效率，N為熒光擴增信號達到閾值強度時擴增產物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（內參基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。
起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
(10)熒光定量軟體的ct值為什麼會變擴展閱讀
熒光定量PCR的原理：
熒光定量PCR技術：在PCR反應體系中加入熒光基團，通過熒光信號不斷累積而實現實時監測PCR全程，然後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量PCR中，對全程PCR擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和熒光信號的變化可以繪製成一條曲線。
實時熒光定量常用的熒光化學分類有SYBR Green I法和Tag Man探針法。
Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。