為什麼低溫下菌種能夠長時間保存

Ⅰ 買回來的（細菌）菌種可以在冰箱冷凍保存么

可以。
細菌菌種在低溫下可以延長存活（保持活性）時間。但具體保存時間和菌種特性以及冷藏溫度有關系。

Ⅱ 菌種保藏

菌種保藏方法大全

基本原理
微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處於最不活躍或相對靜止的狀態，才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。

低溫、乾燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據這三個因素而設計的。

保藏方法大致可分為以下幾種：

1．傳代培養保藏法

又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等（後者作保藏厭氧細菌用），培養後於4—6℃冰箱內保存。

2．液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養基水分蒸發而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。

3．載體保藏法

是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。
4．寄主保藏法

用於目前尚不能在人工培養基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染並傳代，此法相當於一般微生物的傳代培養保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍乾燥保藏法進行保藏。

5．冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、乾冰酒精快速凍結（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷凍乾燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分（真空乾燥）。

有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍乾燥保藏法等均需使用保護劑來制備細胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害。保護性溶質可通過氫和離子鍵對水和細胞所產生的親和力來穩定細胞成分的構型。保護劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞碸等。

三、器材

細菌、酵母菌，放線菌和黴菌；

肉膏蛋白腖斜面培養基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學純的液體石蠟，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黃土或紅土，冰塊、食鹽，乾冰，95％酒精，10％鹽酸，無水氯化鈣；

滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0．5×1．2cm），乾燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30℃），液氮冷凍保藏器。
四、操作步驟、各保藏法的應用范圍及優缺點

下列各法可根據實驗室具體條件與需要選做。

1．斜面低溫保藏法

將菌種接種在適宜的固體斜面培養基上，待菌充分生長後，棉塞部分用油紙包紮好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

保藏時間依微生物的種類而有不同，黴菌、放線菌及有芽孢的細菌保存2—4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細菌最好每月移種一次。

此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優點是操作簡單，使用方便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養基的物理、化學特性不是嚴格恆定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機會亦較多。
2．液體石蠟保藏法

（1）將液體石蠟分裝於三角燒瓶內，塞上棉塞，並用牛皮紙包紮，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾，然後放在40℃溫箱中，使水汽蒸發掉，備用。

（2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養基中培養，使得到健壯的菌體或孢子。

（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為准（圖Ⅶ-12），使菌種與空氣隔絕。

（4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時間還要長）。
此法實用而效果好。黴菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般無芽孢細菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內，亦可保藏3個月之久。此法的優點是製作簡單，不需特殊設備，且不需經常移種。缺點是保存時必須直立放置，所佔位置較大，同時也不便攜帶。從液體石蠟下面取培養物移種後，接種環在火焰上燒灼時，培養物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應特別注意。
3．濾紙保藏法

（1）將濾紙剪成0．5×1．2cm的小條，裝入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾。

（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養基上培養，使充分生長。

（3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培養皿或試管內，取數環菌苔在牛乳內混勻，製成濃懸液。

（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的乾燥器中，用真空泵抽氣至干。

（6）將棉花塞入管內，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存於低溫下。

（7）需要使用菌種，復活培養時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟後，取出濾紙，放入液體培養基內，置溫箱中培養。
細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍乾燥法簡便，不需要特殊設備。

4．沙土保藏法

（1）取河沙加入10％稀鹽酸，加熱煮沸30分鍾，以去除其中的有機質。

（2）倒去酸水，用自來水沖洗至中性。

（3）烘乾，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。

（4）另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數次，直至中性。

（5）烘乾，碾碎，通過100目篩子過篩，以去除粗顆粒。

（6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進行滅菌，烘乾。

（7）抽樣進行無菌檢查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養基中，37℃培養48小時，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。

（8）選擇培養成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養細胞用此法效果不好）優良菌種，以無菌水洗下，製成孢子懸液。

（9）於每支沙土管中加入約0．5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。

（10）放入真空乾燥器內，用真空泵抽干水分，抽干時間越短越好，務使在12小時內抽干。

（11）每10支抽取一支，用接種環取出少數沙粒，接種於斜面培養基上，進行培養，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現雜菌或菌落數很少或根本不長，則說明製作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查。

（12）若經檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內乾燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。

（13）需要使用菌種，復活培養時，取沙土少許移入液體培養基內，置溫箱中培養。

此法多用於能產生孢子的微生物如黴菌、放線菌，因此在抗生素工業生產中應用最廣，效果亦好，可保存2年左右，但應用於營養細胞效果不佳。
5．液氮冷凍保藏法

（1）准備安瓿管用於液氮保藏的安瓿管，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂，因此，需要採用硼硅酸鹽玻璃製造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1．2mm液體的。

（2）加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或黴菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安瓿管塞上棉塞，1．05kg/cm2，121．3℃滅菌15分鍾：若作保存黴菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10％的甘油蒸餾水溶液或10％二甲亞碸蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以後加入的菌落圓塊為限，而後再用1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌15分鍾。

（3）接入菌種將菌種用10％的甘油蒸餾水溶液製成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管；黴菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安瓿管內，然後用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。

（4）凍結再將已封口的安瓿管以每分鍾下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會形成冰的結晶，因而降低存活率。
（5）保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器（圖Ⅶ-14）的小圓筒內，然後再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃，液態氮內為-196℃。

（6）恢復培養保藏的菌種需要用時，將安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安瓿管，將內容物移入適宜的培養基上培養。

此法除適宜於一般微生物的保藏外，對一些用冷凍乾燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的黴菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏，而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。

6．冷凍乾燥保藏法

（1）准備安瓿管用於冷凍乾燥菌種保藏的安瓿管宜採用中性玻璃製造，形狀可用長頸球形底的，亦稱淚滴型安瓿管（圖Ⅶ-15），大小要求外徑6—7．5mm，長105mm，球部直徑9—11mm，壁厚0．6—1．2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾，備用。

（2）准備菌種，用冷凍乾燥法保藏的菌種，其保藏期可達數年至十數年，為了在許多年後不出差錯，故所用菌種要特別注意其純度，即不能有雜菌污染，然後在最適培養基中用最適溫度培養，使培養出良好的培養物。細菌和酵母的菌齡要求超過對數生長期，若用對數生長期的菌種進行保藏，其存活率反而降低。一般，細菌要求24—48小時的培養物；酵母需培養3天；形成孢子的微生物則宜保存孢子；放線菌與絲狀真菌則培養7—10天。

（3）制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例，用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中，製成濃菌液，每支安瓿管分裝0．2ml。
（4）冷凍冷凍乾燥器有成套的裝置出售，價值昂貴，此處介紹的是簡易方法與裝置，可達到同樣的目的。

將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍，無低溫冰箱可用冷凍劑如乾冰（固體CO2>）酒精液或乾冰丙酮液，溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑，只需冷凍4—5分鍾，即可使懸液結冰。

（5）真空乾燥為在真空乾燥時使樣品保持凍結狀態，需准備冷凍槽，槽內放碎冰塊與食鹽，混合均勻，可冷至-15℃。裝置儀器如圖Ⅶ-16，安瓿管放入冷凍槽中的乾燥瓶內。

抽氣一般若在30分鍾內能達到93．3Pa（0．7mmHg）真空度時，則乾燥物不致熔化，以後再繼續抽氣，幾小時內，肉眼可觀察到被乾燥物已趨乾燥，一般抽到真空度26．7Pa（0．2mmHg），保持壓力6—8小時即可。

（6）封口抽真空乾燥後，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管（圖Ⅶ-17）繼續抽氣，約10分鍾即可達到26．7Pa（0．2mmHg）。於真空狀態下，以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進行封口。封口以後，保存於冰箱或室溫暗處。

此法為菌種保藏方法中最有效的方法之一，對一般生活力強的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用，即使對一些很難保存的致病菌，如腦膜炎球菌與淋病球菌等亦能保存。適用於菌種長期保存，一般可保存數年至十餘年，但設備和操作都比較復雜。

Ⅲ 菌種在低溫中保藏的目的是什麼

菌種在低溫情況下體內酶活降低、代謝慢，保存菌種要盡量減少代謝！用的時候重新復甦

Ⅳ 微生物菌種為什麼可以在-20攝氏度下保藏

都需要保護劑的，動物細胞也可以。細菌結構問題使得它比較容易保存，只用加10%左右的甘油就可以在-20攝氏度保存。
動物細胞需要加血清和DMSO，並且需要放到-80或者液氮才行

Ⅳ 細菌的保存方法。

你好！！
（一）培養基保存法
利用各種斜面和半固體培養基，加上石蠟油保存菌種，是一種最常用而又簡易的保存方法。
1.普通瓊脂斜面保存法：腸道桿菌、葡萄球菌等一般細菌可接種於不含糖的普通瓊脂斜面上，斜面底部應加少許無糖肉膏湯，以防乾涸。經35℃培養18～24h後，移種於4℃冰箱中，一般可保存一個月，每月傳代一次。
2.血液瓊脂斜面保存法：鏈球菌、肺炎鏈球菌應接種於血液瓊脂斜面上，35℃培養生長後，置4℃冰箱中保存，鏈球菌須半個月至1個月移種一次，肺炎鏈球菌的新分離菌株須2～4天移種一次，以後逐漸延長移種時間，在適應後可延至半個月移種一次。
3.巧克力色斜面保存法：宜保存腦膜炎奈瑟菌，並在35℃孵箱中保存，一般每2天移種一次。
4.雞蛋斜面保存法：適於保存含有vi抗原的沙門菌屬及其他含表面抗原的細菌，一般可保存一個月。
5.半固體穿刺保存法：將細菌接種於瓊脂半固體或血清瓊脂半固體內，經35℃培養18～24h，再以無菌方法加入滅菌的液體石蠟。高度約lcm，置4℃冰箱保存。保存時間可達3～6個月。

（二）乾燥保存法
原理是將細菌體內的水分蒸發掉，使其處於休眠和代謝停滯狀態，從而達到長期保存菌種的目的。菌種乾燥後低溫保存，可保存數年至十幾年醫學教|育網搜集整理。

（三）冷凍乾燥保存法
本法又稱冷凍真空乾燥法。它綜合利用了各種有利於菌種保存的因素（低溫、乾燥和缺氧等），是目前最有效的菌種保存方法之一。用本法保存的菌種具有成活率高，變異性小等優點，保存期一般3～5年，有的可長達10年以上。

希望能夠幫助你！！

Ⅵ 為什麼常以4℃的溫度作為保存菌種的適宜溫度

將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養基上，適溫培養，當菌絲健壯地長滿斜面時取出，放在3-5℃低溫乾燥處或4℃冰箱、冰櫃中保藏，每隔4-6個月時間移植轉管一次，具體應根據菌種特性決定。保藏時要注意環境溫度不能太高，以防黴菌通過棉塞進入管內。因此，若用棉塞，可用干凈的硫酸紙或牛皮紙包紮棉塞，即可減少污染的機會，也可防止培養基乾燥。除草菇菌種外，其他食用菌菌種都能採用此法保藏。

微生物在其最低生長溫度下代謝活動減弱，處於休眠狀態，維持生命而不發育。因此常以4℃左右的溫度作為保存菌種的適宜溫度。

Ⅶ 食品低溫保藏的基本原理是什麼

食品冷凍保藏就是利用低溫以控制微生物生長繁殖和酶活動的一種方法。
1、低溫對酶的影響
溫度對酶的活性有很大影響，大多數酶的適應活**度為30~40℃。高溫可使酶蛋白變性、酶鈍化，低溫可**酶的活性，但不使其鈍化。

大多數酶活性化學反應的Q10值為2~3。也就是說溫度每下降10℃，酶活性就削弱1/2~1/3。
2、低溫對微生物的影響
低溫與微生物的關系
(1)任何微生物都有一定的正常生長和繁殖的溫度范圍。溫度越低，它們的活動能力也越弱。
故降溫就能減緩微生物生長和繁殖的速度。
溫度降低到*低生長點時，它們就停止生長並出現**。
根據微生物的適宜生長溫度范圍可將微生物分為三大類，嗜熱菌、嗜溫菌和嗜冷菌。在低溫貯藏的實際應用中，嗜溫菌、嗜冷菌是*主要的。

(2)長期處於低溫中的微生物能產生新的適應性，這是長期低溫培育中自然選育後形成了多少能適應低溫的菌種所得的結果。
這種微生物對低溫的適應性可以從微生物生長時出現的滯後期縮短的情況加以判斷。
低溫導致微生物活力減弱和**的原因
微生物的生長繁殖是和活動下物質代謝的結果。因此溫度下降，酶活性隨之下降，物質代謝減緩，微生物的生長繁殖就隨之減慢。
在正常情況下，微生物細胞內總生化變化是相互協調一致的。但降溫時，由於各種生化反應的溫度系數不同，破壞了各種反應原來的協調一致性，影響了微生物的生活機能。

Ⅷ 請知情者說下細菌抗低溫的極限.在冰里細菌能成活多久

細菌在低溫條件下只是放慢了生長速度，基本是不會死的。
說具體點就是：
在冰箱的低溫下貯存食物，並不具有殺滅細菌的作用，只是放慢了細菌生長繁殖的速度。地球上的細菌，根據其生長所需的溫度不同可分成三大類：一是嗜溫菌，它可在10℃-45℃中生長，最適宜溫度是37℃-38℃。二是嗜熱菌，可在40℃-70℃中生長，最適宜溫度是50℃-55℃。三是嗜冷菌，它可在0℃-20℃中生長，最適宜溫度是10℃-15℃。而家用冰箱的冷藏溫度大多數為4℃-10℃，在這樣的低溫條件下，絕大多數微生物生長得緩慢一些，但仍有部分嗜冷菌在這樣的溫度下存活、繁殖。一般情況下，能夠在家庭冰箱里繁殖生長的為嗜冷菌，如果放到冰箱里的食品受到了這些細菌的污染，細菌就會不斷繁殖。人們一旦吃了含有大量嗜冷菌的食品，就可能會致病。與此同時，飯菜從冰箱中取出時，需要一個加熱時逐漸升溫的過程，這也給細菌造成了一個繁殖的良好環境，人們一旦吃了加熱不徹底的飯菜，極有可能會導致腹瀉。

Ⅸ 在什麼溫度下保存菌種,即能保持菌種的活性,又能保證菌種不繁殖

低溫唄
將菌種中加入15%左右的甘油保存，短期放－20℃，長期保存放－70℃。

Ⅹ 保藏菌種的方法有哪些

1、傳代培養保藏法：包括又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，培養後於4-6℃冰箱內保存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間。

3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用於目前尚不能在人工培養基上生長的微生物。

5、冷凍乾燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分（真空乾燥），其中真空冷凍乾燥法最常見。

(10)為什麼低溫下菌種能夠長時間保存擴展閱讀

菌種保藏的原理：

菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運用一些方式盡量降低生物體內的代謝，達到延長生命，減少變異的目的。通常採用的方法為低溫、缺氧、乾燥。

低溫主要對菌種產生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機體細胞的酶活，降低新陳代謝，達到保藏菌種的目的。其次，低溫同時會導致菌體誘發菌絲自溶機制，如果降溫過程失誤，同樣會造成機體的機械損傷和溶質損傷。