高效液相色譜為什麼保留時間最短

① 影響高效液相色譜組分保留時間因素

色譜柱類型，這是最關鍵的因素，關繫到分離效率的好壞，也關乎各個組分的保留時間；
流動相組成，改變流動相組成，就可以改變流動相的極性(正相、反相色譜)或者流動相的離子比例（離子色譜），從而有效改善不同組分的保留時間；
流動相流速，一般在保證分離度的前提下，流動相流速越快，保留時間越短；
流動相中含鹽量，對於某些有機鹼或者有機酸來說，調變流動相中含鹽量可以有效改變分離效率，從而改變保留時間；
流動相溫度，溫度越高，保留時間提前。

② 高效液相做含測，保留時間差別大

是不是同一個樣品不同時間做出來的保留時間差別較大？
保留時間影響因素比較多，如果已經確定pH值影響不大，可以從以下幾個方面進行考慮：
1.流動相的比例，最好保證有機相的比例一致，保存及超聲脫氣的時候用封口膜封一下，減少有機相揮發，也不要放置太長時間
2.柱溫是否恆定，柱溫在一定程度上會影響保留值，最好設為定值，不要設為不控制
3.色譜柱有沒有更換，不同廠家的同一類型色譜柱由於填充技術、制備工藝的不同，在同樣色譜條件下對同一組分的保留情況會有所不同，即使是同一廠家的也會有這種情況
4.液相系統是否更換，不同的色譜儀的管路長短不同，會使走樣時柱壓不同，柱壓也會影響出峰時間和峰形，原理類似於加壓過柱
5.如果是梯度洗脫，要保證平衡時間足夠長，否則也會引起保留值改變

③ 操做液相色譜時影響保留時間的變化的因素有哪些

影響液相色譜保留時間的因素：
1、流動相的比例與極性。對於不同的柱子，分離度和保留時間往往都會有點差別，所以在操作的時候：a、可以適當調整流動相的比列，如甲醇—水（90:10），如分離效果與保留時間延長，可以調整88:12或者92:8或者95:5等。b、有時候還需要更換流動相的組成，甲醇就可以換成乙腈，看具體的實際操作而定。
2、柱子與柱溫。不同的柱子保留時間會有所差別，主要是載體的吸附性和固定液的純度不同，但保留時間一般不會相差太大，可以根據對照品或者標准品的保留時間指定。柱溫在HPLC操作時，一般就調整到室溫或者30度。
3、流速。流速的大小，液相色譜一般調整在0.8mL/min或者1.0mL/min。
4、進樣量。進樣量大，保留時間往往會延長。
5、輸液系統的壓力，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，保留時間將會縮短。
具體的影響因素還要在實際操作中慢慢考察，經過調整後才可以的到較好的色譜條件。