為什麼大腸桿菌復甦時間過長

① 細菌（大腸桿菌）作鏡檢用，在固體培養基上培養的時間易為多久

24 小時，或稍早，時間過久影響會比較大。 我指的影響是革蘭氏染色。
時間延長菌體本身基本無變化，就是會有衰老死亡的菌體，鏡檢呈破裂狀，就是融化的感覺。

有問題再問我喔

② 史上最離奇的OD回長事件

下面是一個論壇中的帖子與回復，希望能夠對你有所幫助：|
我取的-20度甘油保存的菌，過夜復甦，然後按1：100擴大搖一段時間之後加IPTG誘導，搖了3小時之後培養物居然變清亮了！我白思不得其解
望高手指點一下！
--------------------------------------------------------------------------------
你說的培養物變清涼是相對於1%接種後而言的嗎?1：100擴大培養後，細菌變得有多渾濁(測定OD600，一般達到0.5-1.0)?如果加入IPTG後細菌生長得很慢屬於正常現象，因為IPTG對細胞有毒性，加之有抗性壓力，不攜帶質粒的細胞是不生長的.關於你遇到的情況，我想可能是:
1.工程菌的問題，可能攜帶的質粒已經丟失，工程菌不具有抗性，建議在誘導前先檢測一下質粒穩定性.
2.活化誘導時加入的抗生素過低未加或失效，擴大培養時加入抗生素又過量，建議重新配製抗生素.
3.加入的IPTG濃度過高.
4.培養基的問題，營養不足.
--------------------------------------------------------------------------------
1.工程菌的問題，可能攜帶的質粒已經丟失，工程菌不具有抗性，建議在誘導前先檢測一下質粒穩定性.
2.活化誘導時加入的抗生素過低未加或失效，擴大培養時加入抗生素又過量，建議重新配製抗生素，這條也比較勉強。
3.加入的IPTG濃度過高.
4.培養基的問題，營養不足. ，這條不會！
5.噬菌體污染，導致菌體降解。可以重新轉化新的感受態細胞。
6。對部分重組菌來說，過低的誘導前菌量常導致有毒性的IPTG誘導後菌體崩解。
--------------------------------------------------------------------------------
1:不加IPTG時怎麼樣。
--------------------------------------------------------------------------------
不加IPTG 時很正常。後來我換IPTG重復做了一次，菌搖渾了，但菌量不大。同時我在平皿劃線挑單菌落培養，提質粒檢測發現有的已經丟失了，有的仍完好。為保險，我重新轉化了質粒。現在情況比較正常。
多謝各位戰友的指教！！！
--------------------------------------------------------------------------------
會不會是噬菌體污染呢？
--------------------------------------------------------------------------------
我也懷疑過，因為實驗室有人在做噬菌體，但是在一個單獨的屋子做。而且整個實驗室就我一個人遇到這種情況，我想這種可能性比較小。
幸運地是，現在一切良好，進展還算順利。
謝謝大家
願人人事事進展順利！！！
--------------------------------------------------------------------------------
我也學到了一點，謝謝
--------------------------------------------------------------------------------
To:wangjun2002274 我的意見與您相左：
我也遇到過以上的情況，抗生素我是以50ug/ml加kan的。培養基是LB這不會有什麼問題。IPTG誘導之前菌體很渾OD達到0.8左右，加IPTG以後3小時就變清！這個菌種是我4天前復甦的，之後放4度冰箱。但是我後來把菌種重新復甦效果挺好的！包涵體的量也挺好！我的看法是，復甦菌時間不能太長（以6-7小時為宜），即OD值不能太高。尤其是Bl21菌，因為它繁殖速度是DH5a無法比擬的！菌體太老再加上IPTG的毒性是變清的主要原因。我認為。
--------------------------------------------------------------------------------
我覺得可能是遭不明微生物污染了，尤其是很快即變清亮的話十有***都是遭噬菌體了。OD值高低應不是問題，我在發酵罐中OD600達10左右才開始誘導都沒問題。
--------------------------------------------------------------------------------
不曉得樓主出現問題的原因是否與此一樣：
早上我擴大培養搖了兩瓶菌，2個小時渾的很好。加IPTG（不同來源的即我上次出問題的和我借別人的）後，有一瓶（我上次出問題的IPTG）清亮了。我認為是IPTG的原因。為了更確認我用同樣的培養基和IPTG又要了兩瓶，結果出我意料兩瓶都渾得很好。所以我得出以下結論：搖菌的容器有問題！！！因為最近我們實驗室換了一種洗潔凈，清洗時未洗凈！我們實驗室也有人出現類似情況（最近）。我認為殘留與IPTG可能形成對細菌有毒的物質，致使菌體死亡，菌液變清！

③ 做微生物實驗，測抑菌圈大小，細菌培養超過24小時要不要緊啊

作為生物實驗測抑菌圈大小細菌培養超過24小時要不要緊呢？這樣根據他們所培養的時間，有可能他們是需要三天，72個小時，只要他們時間得體的話，他們才能出現這種情況

④ 發酵大腸桿菌時，搖瓶接種至種子罐或發酵罐後不生長，或是長了一段時間又死了，請列舉說明可能的原因

可能存在兩個問題，
1，沒有染菌，但出現發酵過程中質粒丟失。不知道你在上罐的時候是否加壓？可以試一下。
2，存在染菌，上罐就出現這種情況，可能是培養基沒有滅徹底，或者是發酵罐中存在滅菌死角，還有就是空氣過濾系統。這個就需要一一進行檢測了。

⑤ 大腸桿菌存活問題

鹽濃度12%的豆瓣醬，40℃，大腸桿菌不會增殖，但是會永遠存活。一旦鹽濃度和溫度變得適宜，將很快復甦增殖。

⑥ 目前已有-195℃的生物低溫保藏技術，請問到低溫多少度細菌病毒等就不能再度復甦

低溫殺不死細菌和病毒的，一般生物學都是用超低溫保存這些東西的。。。
要殺死細菌和病毒需要高溫，一般高壓滅菌121℃ 20分鍾就可以殺死這些東西了
-196℃已經是地球上最低的溫度了
理論上低溫是殺不死微生物的。。。。。。。。。。
只能高溫殺死

⑦ 高中生物 赫爾希和蔡斯的T2噬菌體侵染大腸桿菌的實驗，

不要聽樓上亂講，上清液是沒有進入細菌內的噬菌體的蛋白質外殼，而沉澱物是細菌內的新生成的子代噬菌體。
首先你要了解噬菌體的生活過程，它是先與細菌接觸，將自身的遺傳物質核酸（此處為DNA）注入到細菌體內，在細菌體內以注入的DNA為模板，利用細菌內游離的物質作為原料，合成DNA和蛋白質，形成子代的噬菌體，最終使細菌裂解，釋放出其中的子代噬菌體，完成繁殖後代的過程。
所以，書上實驗中，當我標記蛋白質時，由於蛋白質外殼沒有進去，所以放射性位於上清液；當我標記DNA時，DNA進去了，所以反射性位於沉澱物中。
當然赫爾希和蔡斯的實驗是與我們的理解反過來，他們正是通過這個實驗知道了噬菌體的DNA進入了細菌而蛋白質外殼沒有進入，從而證明了噬菌體的遺傳物質是DNA。

⑧ 大腸桿菌的侵染實驗～攪拌充分與不充分～保溫時間過長過短分別影響s或p的哪一與組造成什麼結果

攪拌不充分: 用35S標記實驗時,沉澱物出現少量放射性,是少量噬菌體的蛋白質外殼吸附在大腸桿菌表面,隨大腸桿菌離心到沉澱物中,使沉澱物中也會出現少量的放射性.
保溫時間過短:用32P標記實驗時,一部分噬菌體沒有侵染到大腸桿菌細胞內,經離心後分布在上清液中,使得上清液出現放射性。
保溫時間過長:用32P標記實驗時,噬菌體在大腸桿菌體內增殖後釋放子代,經離心後也會分布在上清液中,也會使上清液放射性含量升高。

⑨ 為什麼重組大腸桿菌發酵10幾小時後補料加快pH還是上升（補料主要由甘油組成，另外還有蛋白腖，酵母膏）

誘導以後PH應該上升的，你發酵過程中pH是怎麼調的，補鹼嗎？可能在延長一段時間pH與溶氧有可能會回升