電泳時間長了為什麼還沒有跑出來
① sds-page電泳為什麼跑不出蛋白條帶連marker的也沒有。請高手指教,詳細一點。
上樣緩沖液混合後進行變性,溫度必須要超過95°,時間5—10min,如果沒把握,可以處理10min。也有可能是漏膠,制膠時封膠要嚴,操作不熟練時可以多加一點,待聚合後用去離子水加入電泳槽內,看看是否會漏,如果不會把水倒掉,濾紙吸干後再加入凝膠。加樣的問題,加樣時注意不要刺破凝膠,以避免樣品直接漏出。
② sds-page電泳時蛋白樣品沒有跑出條帶,急求原因
可能有幾個原因:
一:上樣緩沖液,用分子克隆上的配方做一次試試看(你所用的緩沖液是不是很久了?)
二:如果你染色,脫色都沒有問題,PAGE膠是不會說謊的
三:不知道你是在哪種波長下所測得有數值?280nm是共軛雙鍵的吸收波長,很多物質都會有吸收,如果做親和層析時咪唑也有吸收,RNA在280下也有吸收,可能你測得的是RNA?
那麼你的蛋白質Marker有沒有顯示條帶?
③ 請教各位,電泳後加樣孔很亮,但沒有跑出條帶是怎麼回事啊
DNA片段沒有跑出去拉
你在點樣的時候砸進了膠板里
片段太長,跑電泳的時間不夠膠板的濃度太高等等:)
④ 電泳怎麼都跑不出條帶
每次電泳時候跑marker了嗎?如果marker沒有,是膠的問題,可能是核酸染料加少了或者電泳時間過長,染料跑沒了。如果marker有,多半是樣品的問題。
或者是跑膠時間過長 樣品都跑出去
⑤ 為甚sds page電泳的條帶都跑下面去了,沒有跑開呢(圖1)是膠出了什麼問題還是加樣少了呢
跑的時間太長了,到最後跑到一起了,最好在指示劑到下沿時就停止電泳,或者電壓太高,換小點的試試
⑥ 瓊脂糖凝膠電泳圖上樣孔中的條帶跑不出來怎麼回事
點樣沒點好或者制孔沒制好,樣品沒提出DNA根據目的條帶長度來調整凝膠濃度,一般1.5%左右,也不一定。紫外燈下沒見帶,不一定沒有出孔,而是量少看不到,可以測一下濃度看一下,或直接試跑一下PCR。
電泳時間可能過長,一般75v×30min左右,但是具體看溴酚藍得離孔距離和目的條帶離孔距離。利用電泳可以確定膠體微粒的電性質,向陽極移動的膠粒帶負電荷,向陰極移動的膠粒帶正電荷。金屬氫氧化物、金屬氧化物等膠體微粒吸附陽離子,帶正電荷;非金屬氧化物、非金屬硫化物等膠體微粒吸附陰離子,帶負電荷。
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在確定的條件下,帶電粒子在單位電場強度作用下,單位時間內移動的距離(即遷移率)為常數,是該帶電粒子的物化特徵性常數。不同帶電粒子因所帶電荷不同,或雖所帶電荷相同但荷質比不同,在同一電場中電泳,經一定時間後,由於移動距離不同而相互分離。
分開的距離與外加電場的電壓與電泳時間成正比。在外加直流電源的作用下,膠體微粒在分散介質里向陰極或陽極作定向移動,利用電泳現象使物質分離。膠體有電泳現象,證明膠體的微粒帶有電荷。各種膠體微粒的本質不同,它們吸附的離子不同,所以帶有不同的電荷。
⑦ 看我的PCR擴增產物跑的電泳,其中一個為什麼沒跑出來,怎麼判斷DNA模板是不是有問題
電泳圖為什麼沒貼上來?
沒跑出來的因素很多。別的都有就這一個沒有的話,首先考慮肯定是模板有沒有問題。其次機器和試劑還有PCR管是不是夠干凈或者夠穩定。最後考慮有沒有加錯。
要判斷模板有沒有問題,你就按照之前的試驗方案,就拿這一個樣品,做梯度試驗,做三四個樣就可以了吧,同時拿上次做出來了的做對照。如果這次能出來,就說明模板沒問題,是別的原因。如果還沒有,就考慮模板有問題了。
⑧ 跑瓊脂糖凝膠電泳的時候loading buffer 沒跑出去是什麼原因
以平板電泳為例,不知你指的是從上下垂直表面跑出去還是指水平跑出去呢?
如果是水平方向的話,那是因為跑的時間沒有足夠久,一般我們都不會跑那麼久讓他跑出去的,那樣不只浪費時間還影響實驗。
如果你是指上下垂直表面的話:是因為跑電泳時候是在一個水平的電場中進行的,電源正負兩極之間的電場也是水平方向而不是彎曲的,loading buffer混合的樣品中的電子當然也是順著電場的水平方向移動的,所以呢,它是不會跑出膠外面的。
⑨ 如果樣品電泳後很久都沒有跑出點樣孔,有哪幾方面的原因
點樣之後放置時間過長,樣品已經和電泳液混合起來了,因此,上樣量變小,甚至沒有,自然就跑不出來。
⑩ 電泳跑的時間長了會出現怎麼樣的結果
1條帶跑到膠外,使得條帶損失
2條帶擴散變寬變暗。