為什麼有的pcr同樣的東西都不一樣

1. PCR的時候用普通Taq酶能P出的東西，為什麼換了高保真酶之後，同樣的循環條件為什麼P不出條帶

不同的酶反應條件不一樣唄，其實實在做不出來也不用去瞎折騰了，找公司做也可以的，威斯騰就不錯。

2. 菌落PCR產物檢測大小對的,可送去測序結果就不對，不是我要的東西，這是為啥呢

條帶是特異性的么？
如果是引物特異性的問題，應該有許多的雜帶。
可以把PCR產物再P一次，看是否還有條帶
或者換個體系重P一次

3. 做PCR的時候為什麼同樣的東西同樣的操作，結果就是會不一樣呢，有時候連帶都不出，

檢查儀器，或者其他什麼原因！或者是某些步驟沒作到位，做理學實驗就是這樣！要有耐心，要不然不天天有人拿諾貝爾，生物實驗可能N個實驗才成功一個！

4. 我做PCR為什麼篩溫度的時候都能P出條帶，等到篩好溫度了卻沒有條帶了　而且做了兩次反復　相同的東西

PCR的模板或引物比較復雜時，各種怪事都會有。
如果你的實驗體系沒問題，你可以試試先以較高退火溫度p上5個循環，再以你篩的溫度p上30個循環。
或者把你的目的條帶切膠回收，稀釋後作模板再p。

5. 我最近做PCR，目的條帶是321bp，但是我擴出來的陰性對照都有條帶，而且和樣本條帶擴出來的一樣

最大的可能就是污染了唄，PCR配體系與加模板時都要戴口罩手套，外加最好不要再你們常做實驗的地方加這些東西，空氣中極有可能有相應模板氣溶膠存在。

6. PCR相關的問題

我覺得根據你說的，就有一種可能啊，就是你的模板降解了。這個基因比較難擴增，所以對模板的要求比較高。引物應該很少降解，而且你以前也做出來了。

我建議你除了引物和模板全部換成你們隔壁實驗室的試劑，連pcr儀最好也用別人的試試，因為什麼都有可能壞，而且你trouble shooting的時候沒有做positive control，怎麼知道不是你的dNTP或者polymerase壞了，所以之後的實驗一定要做positive control。如果還不行，重新制備模板，引物一般沒有問題，祝你成功

好吧，照你說的，每個環節都沒有問題了，那估計是引物的問題了，但是我沒有碰到過這樣的情況，所以沒有感性認識啊，照常理說，什麼東西都一樣，出來的結果不同，想不通。。。

7. 為什麼我的PCR產物有一半能跑出來啊還有一半什麼都沒有做了2次都這樣。

樓主能不能說的具體點
PCR是個敏感的體系，做不出來很正常。我不知道樓主你為什麼認為你另外5個樣本應該一定可以擴出東西，難道你做了10組重復？你那些樣品跟擴出來的比模板，引物，酶，退火溫度，循環數等參數都是一樣的？
有時候就是這樣，用同樣的體系擴增同樣的東西還會出現不同的結果，就看你用PCR做什麼了，如果是驗證性實驗，你最好優化一下體系，實在不行換個人做一做，也許就峰迴路轉了。
祝福樓主啊！

8. 我的質粒做PCR，第一次很成功，但後來同樣的試劑和條件就再也不成功了，高手們救命啊

這個？PCR太考驗人品了。多做幾遍吧

9. pcr同樣的東西同樣的溫度，怎麼小片段擴出來了，全長就擴不出來

本來小片段就比大片段好擴很多。
增加延伸時間和反應數，得到微量的全長，再p一次。

10. 相同引物熒光定量PCR與普通PCR擴增出來的片段大小是否相同

啥跟啥
啥叫說明書結果為238
同樣的引物同樣的模板在同樣的條件下p出來的東西肯定一樣
當然也可能引物的特異性不好
熒光的和普通的退火溫度不一樣
出來的東西不一樣
測序一下就知道了