剛果紅培養基中間為什麼是深顏色

A. 剛果紅染色法方法二為什麼有假陽性方法一和方法二培養基中都有可能有雜菌啊，為什麼只有方法二出現假陽

假陽性反應就是假的陽性反應。剛果紅染色後需要的菌會表現出陽性反應（即透明圈）。但方法二有可能出現不是用戶需要的菌，但也出現了透明圈，所以被誤認為需要的菌，這就是假陽性反應。

方法一是後染色，方法二是先染色，先染色就導致染液在培養基中的時間較長，雖然剛果紅是只染纖維素，澱粉等的分解產物雖不影響纖維素，但會沖淡染色反應，出現模糊透明圈（即假陽性）。另外還有色素分解的問題。如果是後染（方法一），之前沒有染液存在，就沒有沖淡的問題了，就沒有假陽性了。

(1)剛果紅培養基中間為什麼是深顏色擴展閱讀：

注意事項：

1、該產品用於定性組織學染色,有選擇性地使福爾馬林固定、石蠟包埋組織中的澱粉體顯色。

2、確定澱粉樣變性及玻璃樣變性的膠原組織，後者在剛果紅法染色後呈淡桔色，常用於診斷甲狀腺髓樣癌和胰島細胞瘤等。

3、當在含有纖維素的培養基中 加入剛果紅時，剛果紅能與培養基中的 纖維素形成紅色復合物，但當纖維素被纖維素酶分解後，剛果紅-纖維素的復合 物就法形成，培養基中就會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。

B. 剛果紅染色法的兩種方法都是在鑒別培養基上進行的嗎

用這方法判斷酶活力大小的,實際上剛果紅是結合到培養基的多糖底物,但分解纖維素的細菌可以產纖維素酶,能分解這個多糖底物成為寡糖,這樣剛果紅就不能結合上去了,氯化鈉呢就可以使結合不牢的剛果紅洗去,這樣就留下大大小小的透明圈,大的透明圈當然分解纖維素的能就強啦.
剛果紅染色法的原理
剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物.當纖維素被纖維素酶分解後,剛果紅——纖維素的復合物就無法形成,培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈,通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌.
剛果紅染色法：
常用的剛果紅染色法有兩種,一種是先培養微生物,再加入剛果紅進行顏色反應,另一種是在倒平板時就加入剛果紅.
方法一 在長出茵落的培養基上,覆蓋質量濃度為1 mg／mI.的CR溶液,10～15 min後,倒去CR溶液,加入物質的量濃度為l mol／I.的NaCI溶液,15 min後倒掉NaCl溶液,此時,產生纖維素酶的茵落周圍將會出現透明圈.
方法二 配製質量濃度為10 mg／mI.的CR溶液,滅菌後,按照每200 mI.培養基加入1 mI.的比例加入CR溶液,混勻後倒平板.等培養基上長出茵落後,產生纖維素酶的菌落周圍將會出現明顯的透明圈.
兩種剛果紅染色法的比較
剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應用已經有超過20年的歷史,課本中給出了兩種方法.方法一是傳統的方法,缺點是操作繁瑣,加入剛果紅溶液會使菌落之間發生混雜；其優點是這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用.方法二的優點是操作簡便,不存在菌落混雜問題,缺點是由於在纖維素粉和瓊脂、土豆汁中都含有澱粉類物質,可以使能夠產生澱粉酶的微生物出現假陽性反應.但這種只產生澱粉酶的微生物產生的透明圈較為模糊,因為培養基中纖維素佔主要地位,因此可以與纖維素酶產生的透明圈相區分.方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素的能力,它們在長時間培養過程中會降解剛果紅而形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區分.

C. 為何剛果紅染色法中說道微生物分解了纖維素會就出現透明圈，剛果紅本身不就是就是紅色嗎

剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但並不和水解後的纖維二糖和葡萄糖發生這種反應。在含有纖維素的培養基中加入剛果紅染色後，再Nacl用漂洗，Nacl可以使結合不牢的剛果紅洗去，這樣就留下大大小小的透明圈

D. 分離根瘤菌的培養基中加入剛果紅的目的是什麼

加入剛果紅的目的是把根瘤菌與其他的菌區分開，根瘤菌會產生大量的胞外多糖，且有比較厚的莢膜，因此不會被剛果紅染成紅色，而其它的菌則被染成紅色。

E. 為什麼在剛果紅的培養基中會出現透明圈

纖維素可以被纖維素酶分解為纖維二糖，再分解為葡萄糖，而纖維素可以和剛果紅染液形成紅色復合物。
而纖維素分解菌產生纖維素酶，將菌落的周邊的纖維素分解，復合物消失，紅色褪去，出現透明圈。

F. 兩種剛果紅染色法的問題

1、加入氯化鈉溶液的作用是洗去未結合或者結合不牢的剛果紅染液，使透明圈更清晰。沒啥可具體的了。。。
2、鑒別培養基加土豆汁是為了細菌更好的生長。因為土豆汁是比纖維素更好的碳源（你可以理解為更好吃的食物），有土豆澱粉的情況下細菌可以更好的生長和繁殖，只有細菌繁殖到一定數量才能進行下面的鑒定操作，所以土豆汁是必須加的。
3、假陽性反應就是假的陽性反應。我們認為，剛果紅染色後，我們需要的菌會表現出陽性反應（即透明圈）。但方法二有可能出現不是我們要的菌，但也出現了透明圈，所以被誤認為我們要的菌，這就是假陽性反應。
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其實方法一是後染色，方法二是先染色。先染色就導致染液在培養基中的時間較長，雖然剛果紅是只染纖維素，澱粉等的分解產物雖不影響纖維素，但會沖淡染色反應，出現模糊透明圈（即假陽性）。另外還有色素分解的問題。如果是後染（方法一），之前沒有染液存在，就沒有沖淡的問題了，就沒有假陽性了。

G. 為什麼有些菌在剛果紅培養基上能生長，但產生透明圈

剛果紅染色法特指纖維素的染色法，剛果紅能把纖維素染成紅色復合物，對纖維二糖和葡萄糖無作用，可用此來鑒別纖維素或纖維素分解菌的分解作用。
剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解後，剛果紅——纖維素的復合物便沒法形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌

H. (1/2)剛果紅鑒定培養基,第二個方法，就是先加剛果紅在凝固培養基的，菌落周圍已被染色的區域，會出現透...

剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解後，剛果紅——纖維素的復合物就無法形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，通過是否產生透明圈來篩選纖維素酶菌。
以上反應都是化學反應，因為形成復合物或者有鍵的斷裂。就是一開始形成剛果紅-纖維素復合物，但是纖維素酶的作用下還是可以將纖維素這個長鏈水解而失去顏色。

I. 為什麼傳統剛果紅染色法會出現菌落混雜現象

（一）培養基對微生物的選擇作用

在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基，稱做選擇培養基。

（二）測定微生物數量的常用方法

1、稀釋塗布平板法

2、顯微鏡直接計數法

思考：如何從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數？

先統計3個平板，並計算出平板菌落數的平均值，然後計算：每克樣品中的菌落數=（某稀釋度下平板上生長的平均菌落數÷塗布平板時所用的稀釋液的體積）×稀釋倍數。

（三）實驗設計——土壤中某樣品細菌的分離與計數

實驗的具體操作步驟如下：

1、土壤取樣

從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先准備好的信封中。

2、制備培養基

准備牛肉膏蛋白腖培養基和選擇培養基。將菌液稀釋相同的倍數，在牛肉膏蛋白腖培養基上生長的菌落數目應明顯多於選擇培養基上的數目，因此，牛肉膏蛋白腖培養基可以作為對照，用來判斷選擇培養基是否起到了選擇作用。由於初次實驗，對於稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數為103～107。每個稀釋度下需要3個選擇培養基，1個牛肉膏蛋白腖培養基，因此共需要15個選擇培養基，5個牛肉膏蛋白腖培養基。此外，還需要准備8個滅菌的試管和1個滅菌的移液管。

3、微生物的培養與觀察

依次等比稀釋至107稀釋度，並按照由107至103稀釋度的順序分別吸取0.1mL進行平板塗布操作。

將塗布好的培養皿放在30℃下培養。隨著培養時間的延長，會有不同的菌落產生。比較牛肉膏培養基和選擇培養基中菌落的數量、形態等，並做好記錄。

挑選選擇培養基中不同形態的菌落接入含酚紅培養基的斜面中，觀察能否產生顏色反應。

4、細菌的計數

當菌落數目穩定時，選取菌落數在30～300的平板進行計數。在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復計數，然後求出平均值，並根據平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數目。

思考：為什麼分離不同的微生物要採用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數量，選用的稀釋范圍相同嗎？

這是因為土壤中各類微生物的數量（株/g）是不同的，因此，為了獲得不同類型的微生物，就需要不同的稀釋度進行分離，同時還應當有針對性地提供選擇培養的條件。

（四）剛果紅染色法的原理

剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解後，剛果紅——纖維素的復合物就無法形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。

（五）分離土壤中纖維素分解菌的實驗設計

實驗的具體操作步驟如下：

1、土樣採集

土樣採集的方法與上一實驗設計中的類似。土樣的採集要在富含纖維素的環境中進行，這是因為在纖維素含量豐富的環境中，通常會聚集較多的分解纖維素的微生物。如果找不到合適的環境，可以將濾紙埋在土壤中，過一個月左右也會有能分解纖維素的微生物生長。

2、選擇培養

選擇培養需要的儀器有：250mL錐形瓶、無菌稱量瓶、葯匙、1mL和10mL的移液管、天平、搖床、溫度計等。

培養基的制備參照課本旁欄中的比例配製。在250mL錐形瓶中裝入30mL培養基，用8層紗布做成瓶塞，將瓶口塞緊，再在瓶塞外包裹兩層包裝紙（或報紙），用線繩扎緊，在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。

選擇培養的操作：稱取土樣20g，在無菌條件下加入裝有30mL培養基的搖瓶中。將搖瓶置於搖床上，在30℃下振盪培養1～2d，至培養基變混濁。此時可以吸取0.1mL培養液進行梯度稀釋和塗布平板，也可以重復選擇培養的步驟一次，然後再進行梯度稀釋和塗布平板。

3、剛果紅染色法分離纖維素分解菌

這一步所需要的儀器有：無菌培養皿、塗布器、1mL移液管，裝有9mL無菌水的20mL大試管，溫箱等。

培養基的制備參照課本旁欄中的比例配製。在500mL三角瓶中裝入200mL培養基，在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。

倒平板操作：將滅菌後的固體培養基熔化，按無菌操作的要求，在無菌的培養皿中倒入15～20mL培養基，凝固後待用。

制備菌懸液：按照本專題課題1的稀釋操作方法，將選擇培養後的培養基進行等比稀釋，稀釋最大倍數至106。

塗布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1mL，滴加在平板培養基上，用塗布器將菌液塗布均勻，在30℃倒置培養，至菌落長出。每個稀釋度下需塗布3個平板，並注意設置對照。

剛果紅染色法：

常用的剛果紅染色法有兩種，一種是先培養微生物，再加入剛果紅進行顏色反應，另一種是在倒平板時就加入剛果紅。

方法一在長出茵落的培養基上，覆蓋質量濃度為1 mg／mI。的CR溶液，10～15 min後，倒去CR溶液，加入物質的量濃度為l mol／I。的NaCI溶液，15 min後倒掉NaCl溶液，此時，產生纖維素酶的茵落周圍將會出現透明圈。

方法二配製質量濃度為10 mg／mI。的CR溶液，滅菌後，按照每200 mI。培養基加入1 mI。的比例加入CR溶液，混勻後倒平板。等培養基上長出茵落後，產生纖維素酶的菌落周圍將會出現明顯的透明圈。

J. 剛果紅染色，為什麼出現透明圈

剛果紅（CR）能與多糖（如纖維素）形成紅色復合物，但不與纖維素水解後生成的纖維二糖和葡萄糖發生反應；剛果紅是與培養基中的纖維素反應，使得整個培養基呈現紅色，不是菌體內有纖維素。而菌體產生的纖維素酶是分泌到體外的，就會把菌落周圍培養基中的纖維素分解掉，使得菌落周圍的培養基的紅色消失，從而形成周明圈。